宿主細(xì)胞殘留 DNA 檢測(cè)的方法驗(yàn)證包含三類。完整驗(yàn)證針對(duì)新分析方法、文獻(xiàn)報(bào)道方法及研發(fā)商業(yè)試劑盒；部分驗(yàn)證用于已完整驗(yàn)證的生物分析方法的修改場(chǎng)景，像方法轉(zhuǎn)移（如實(shí)驗(yàn)室轉(zhuǎn)移 ）、檢測(cè)方法改變（如換儀器 ）、樣品基質(zhì)變化、同一基質(zhì)不同種屬變化（rat - mouse ）、相關(guān)線性濃度范圍變化、前處理方法改變等情況；交叉驗(yàn)證則在應(yīng)用不同方法從一項(xiàng)或多項(xiàng)試驗(yàn)獲數(shù)據(jù)，或同一方法從不同試驗(yàn)地點(diǎn)獲數(shù)據(jù)，需對(duì)比這些數(shù)據(jù)時(shí)開展，通過(guò)不同驗(yàn)證類型適配多樣檢測(cè)需求，保障檢測(cè)方法可靠有效 。

美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）提醒使用HEK293T細(xì)胞生產(chǎn)病毒載體時(shí)因存在SV40 T抗原，還需要檢測(cè)殘留的腺病毒E1（E1A & E1B）和SV40 T抗原序列。《中國(guó)藥典》有關(guān)生物制品宿主殘留核酸質(zhì)量控制要求和CDE頒布的《細(xì)胞***產(chǎn)品申請(qǐng)臨床試驗(yàn)藥學(xué)研究和申報(bào)資料的考慮要點(diǎn)》中關(guān)于質(zhì)粒和病毒載體的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)也提到，如使用HEK293細(xì)胞進(jìn)行病毒載體生產(chǎn)，需進(jìn)行宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)和RNA殘留、SV40大T抗原DNA殘留、E1A和E1B基因DNA殘留檢測(cè)。

在宿主細(xì)胞殘留 DNA（HCD）檢測(cè)試劑盒更換時(shí)，需進(jìn)行系列驗(yàn)證考量。首先參考《已上市生物制品藥學(xué)變更研究技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》，依對(duì)生物制品安全性、有效性和質(zhì)量可控性的風(fēng)險(xiǎn)及影響程度分類，實(shí)施變更要開展充分研究與驗(yàn)證 。接著做全面性能驗(yàn)證，用藥典或經(jīng)驗(yàn)證檢測(cè)方法，證明變更后分析方法等效或更優(yōu) 。然后進(jìn)行樣品檢驗(yàn)，對(duì)比變更前后產(chǎn)品質(zhì)量數(shù)據(jù)并綜合評(píng)估，借穩(wěn)定性研究開展穩(wěn)定性可比性分析，檢測(cè)細(xì)微差異，評(píng)價(jià)變更對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量影響 。以上完成后再進(jìn)行更換試劑盒備案，若變更后方法同原方法或更優(yōu)，據(jù)待檢樣品是原液或制劑，分屬中等或微小變更，微小變更可在中等變更申請(qǐng)時(shí)一并說(shuō)明 。

關(guān)于宿主細(xì)胞殘留DNA（rDNA）的風(fēng)險(xiǎn)研究，主要包括傳染性、致病性、免疫原性等，各國(guó)藥典對(duì)其殘留量有著嚴(yán)格的限度要求：美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）發(fā)布的指導(dǎo)原則中指出生物制品宿主細(xì)胞DNA殘留限度不得超過(guò)100 pg/劑，對(duì)于大劑量的生物制品（如單克隆抗體），根據(jù)其殘留DNA來(lái)源及給藥途徑，DNA殘留量可放寬至10 ng/劑?！稓W洲藥典》通則規(guī)定的生物制品殘留DNA限度大多為不超過(guò)10 ng/劑。2025版《中國(guó)藥典》三部規(guī)定，以細(xì)胞基質(zhì)生產(chǎn)的生物制劑DNA殘留量不能超過(guò)100 pg/劑。

宿主細(xì)胞殘留 DNA 檢測(cè)體系（qPCR 法）技術(shù)關(guān)鍵點(diǎn)涵蓋多方面。首先是靶標(biāo)序列查找及確定，需依據(jù)宿主物種基因組序列，篩選物種特異、高度重復(fù)且散在分布的序列作為靶標(biāo) 。其次是檢測(cè)體系建立和方法驗(yàn)證，要在合適位點(diǎn)設(shè)計(jì)引物與探針，選適配熒光和淬滅基團(tuán)，基于 qPCR 法優(yōu)化體系組分比例，得到 MIX 用于微量 DNA 模板檢測(cè)，同時(shí)驗(yàn)證線性范圍、專屬性等多項(xiàng)指標(biāo) 。還需確保檢測(cè)體系穩(wěn)定，做好參考品準(zhǔn)確標(biāo)定、控制試劑批間差異 。另外，要有合適的宿主細(xì)胞殘留 DNA 提取體系，應(yīng)對(duì)不同樣品基質(zhì)影響，回收提取微量殘留 DNA 并純化 。

SHENTEK^® Hi5&AcNPV 殘留 DNA 檢測(cè)試劑盒（多重 PCR-熒光探針?lè)ǎ┯糜诙繖z測(cè)昆蟲細(xì)胞（High Five）桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)來(lái)源的基因工程疫苗中殘留的 Hi5 細(xì)胞 DNA和桿狀病毒（AcNPV）DNA 的試劑盒。本試劑盒利用熒光探針原理，采用多重 qPCR 的方法定量檢測(cè)樣品中 Hi5 和 AcNPV殘留 DNA。檢測(cè)快速，專一性強(qiáng)，性能穩(wěn)定可靠，檢測(cè)限可以達(dá)到 50 copies/反應(yīng)。試劑盒配套有 Hi5&AcNPV 定量參考品。本試劑盒與 SHENTEK^®宿主細(xì)胞殘留 DNA 樣本前處理試劑盒配套使用，可準(zhǔn)確定量樣品中殘留的 Hi5&AcNPV 微量 DNA。